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> 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) > 한국미생물·생명공학회지 > 40권 2호

Thermoplasma acidophilum 유래 α-glucosidase로 부터 생산된 glycosynthase 돌연변이 단백질의 개선된 당전이 효율

Improvement of Transglycosylation Efficiency using a Glycosynthase Mutant derived from Thermoplasma acidophilum α-Glucosidase

황성민 ( Sung Min Hwang ) , 서성화 ( Seong Hwa Seo ) , 박인명 ( In Myoung Park ) , 최경화 ( Kyoung Hwa Choi ) , 김도만 ( Do Man Kim ) , 차재호 ( Jae Ho Cha )

- 발행기관 : 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회)

- 발행년도 : 2012

- 간행물 : 한국미생물·생명공학회지, 40권 2호

- 페이지 : pp.104-110 ( 총 7 페이지 )


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논문제목
초록(한국어)
Glycosynthase는 친핵성 아미노산을 비친핵성 아미노산으로 치환하여 당전이 산물의 가수분해를 막아서 당전이 효율을 증가시킬 수 있다. 이전 연구에서 본 실험실은 열에 안정하고 산에 강한 Thermoplasma acidophilum 유래의 α-glucosidase (AglA)가 당전이 활성이 있음을 입증하였으나 시간이 지남에 따라 당전이 산물이 가수분해 되었다. 이러한 AglA의 당전이 효율을 개선하기 위하여 친핵성 아미노산인 아스파라긴산을 글리신으로 치환하였다. 이 치환된glycosynthase는 니켈 친화력 크로마토그래피를 통하여 정제되었으며, 정제된 돌연변이 단백질의 배당체를 합성하는 능력이 말토오스를 공여체로 그리고 p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside(pNPαG)를 수용체로, 그리고 pNPαG가 당공여체 및 수용체로 이용될 수 있는지 검사하였다. Glycosynthase를 이용한 당전이 산물의 수율은 약 42.5%를 보였으며 시간이 지남에 따라서 가수분해되지 않았다. 박막 크로마토그래피법을 이용한 반응산물의 분석은 수용체의 높은 농도에서 기존의 효소보다 많은 양의 배당체를 합성할 수 있음을 보여주었고, 특히 중성보다 낮은 pH 영역에서 가장 높은 활성을 보여줌을 확인하였다. 이러한 결과는 glycosynthase가 산업적으로 배당체를 합성하는데 유용성이 크다는 것을 나타낸다.
초록(외국어)
Glycosynthase is an active site nucleophile mutant enzyme, prepared from glycosidase, which is capable of synthesizing oligosaccharide derivatives without the hydrolysis of the product. Thermoacidophilic α-glucosidase of Thermoplasma acidophilum (AglA) exhibits a transglycosylating activity yielding various glycosides. AglA was converted to glycosynthase by the substitution of the catalytic nucleophile Asp-408 residue into non-nucleophile glycine in order to increase its ability to synthesize various glycosides by transglycosylation. The glycosynthase mutant was purified by Ni-NTA chromatography and its glycoside-synthesizing activity was measured by using an external nucleophile, sodium formate buffer, providing maltose as a donor and pnitrophenyl- α-D-glucopyranoside (pNPαG) as an acceptor, respectively. In addition, pNPαG was examined for its feasibility to act as both a donor and an acceptor, and products were compared with those of the wildtype enzyme. The mutant enzyme was found to catalyze the formation of a specific product from pNPαG with a yield of 42.5% without further hydrolysis, while the wild-type enzyme produced two pNPαG products at low yields. The results demonstrate the possibility of satisfactory yields for the reactions in the presence of small amounts of acceptor, and demonstrate that the high activity of the mutant, at pHs below neutrality, was applicable in the transfer of glucose from the natural donor.

논문정보
  • - 주제 : 자연과학분야 > 생물
  • - 발행기관 : 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회)
  • - 간행물 : 한국미생물·생명공학회지, 40권 2호
  • - 발행년도 : 2012
  • - 페이지 : pp.104-110 ( 총 7 페이지 )
  • - UCI(KEPA) : I410-ECN-0102-2012-470-003092350
저널정보
  • - 주제 : 자연과학분야 > 생물
  • - 성격 : 학술지
  • - 간기 : 계간
  • - 국내 등재 : KCI 등재
  • - 해외 등재 : - / SCOPUS
  • - ISSN : 1598-642x
  • - 수록범위 : 2002–2020
  • - 수록 논문수 : 1112